<< Главная страница

ПРИЛОЖЕНИЕ

СБОР, ХРАНЕНИЕ И ОБРАБОТКА РАЗДАТОЧНОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОГО ПРАКТИКУМА ПО ЗООЛОГИИ БЕСПОЗВОНОЧНЫХ

Успешное проведение занятий по зоологическому лабораторному практикуму во многом зависит от полноты материала, предлагаемого студентам для изучения, и тщательности его предварительной обработки. При крайнем, разнообразии материала приходится пользоваться различными методами как при сборе животных, так и при лабораторной их обработке. Краткое описание важнейших из них поможет, можно надеяться, не только в организация и проведении практикума, но и в работе молодого учителя-биолога. В последнем случае особенно ценны навыки по подготовке раздаточного зоологического материала, приобретаемыея а студенческой скамье. В лабораторном практикуме возможности в этом отношении крайне ограничены; обычно такие навыки приобретаются на летней полевой практике. Более подробно разработанные технические и методические указания и к тому же для более-обширного круга животных можно найти в капитальном руководстве "Большой практикум по зоологии беспозвоночных" под редакцией профессора Ю. И. Полянского; ч. I, второе издание, 1958; ч. II, 1946.

ПРОСТЕЙШИЕ

Разведение (культивирование) простейших. Различные свободноживущие простейшие - саркодовые, жгутиконосцы и инфузории - обитают нередко совместно. Поэтому наряду со специальными приемами работы с каждой группой ряд методов и технических указаний распространяется на всех простейших. Сбор простейших в природе непосредственно перед занятием не надежен. Раздаточный материал в нужном количестве и качественном составе обеспечивается только культивированием, т. е. созданием условий, благоприятных для жизни и размножения простейших.

Посуда. Для получения сборной культуры простейших пригодна разнообразная посуда из прозрачного не зеленоватого (бутылочного) стекла. Всякая металлическая посуда исключается из-за вредных влияний на животных металла, растворенного в воде, хотя бы даже в ничтожных дозах.-Более пригодны банки с прямоугольным дном - аккумуляторные банки, прямоугольные стаканчики, но достаточно хороши и цилиндрические банки и стаканы и даже банки из-под консервов. Выборка материала облегчается при содержании его в плоских сосудах: кристаллизаторах (с отвесными стенками) и просто-квашницах (с наклонными стенками); такие же сосуды небольшого объема - чашки Коха и чашки Петри.

Посуда требуется разной емкости: от 1/5-1/3 л до 3-4 л. Воду для культивирования простейших следует брать дождевую или талую; речную, озерную или прудовую воду необходимо предварительно кипятить и фильтровать через густое шелковое сито или бумажный складчатый фильтр. Водопроводная вода не пригодна, так как она хлорирована. Если все

312

же приходится прибегать к водопроводной воде, ее следует предварительно дехлорировать. Для этого ее оставляют на несколько дней (от 7 до 10) в стеклянном сосуде и время от времени помешивают стеклянной палочкой; хлор постепенно улетучивается, а вода одновременно насыщается кислородом. Перед использованием воду профильтровать, как указано выше. Все же и после этого нельзя быть уверенным в полной пригодности такой воды для культивирования простейших. По мере испарения добавлять свежую воду, сохраняя, по возможности, один и тот же уровень.

Условия содержания банок с культурой. Развитие простейших во многом зависит от температуры воды и освещения. Наиболее благоприятна температура в пределах 18-23°С; отрицательно сказывается не столько уровень ее, сколько резкая смена низкой и повышенной температуры. В дневном хорошем освещении нуждаются многие простейшие, для чего банки с культурой помещают вблизи окна, но защищают их каким-либо экраном (занавеска, ширма, картонная пластинка и т. п.) от неблагоприятного действия прямых лучей солнца в летнее время.

Устранить всякую возможность загрязнения воды каким-либо химическим веществом; в частности, пользоваться специально выделенными для аквариумов пипетками и не сливать обратно в банки пробы, взятые для просмотра. Сосуды с культурой не переносить с места на место, избегая тем самым встряхивания жидкости. Держать их закрытыми стеклянными пластинками; этим уменьшается испарение воды и загрязнение культуры пылью. Питательная среда для простейших. Пищей простейшим чаще всего служат бактерии; поэтому для культивирования простейших готовят тем или иным способом питательную среду, богатую бактериями. Хорошие результаты достигаются настоем рисовых (или пшеничных) зерен, почвенным и навозным настоями.

В колбе кипятить несколько минут зерна риса или пшеницы. Одновременно в другой колбе прокипятить воду, охладать ее при комнатной температуре, разлить в несколько чашек (например, Коха) и в каждую поместить по несколько подготовленных зерен.

Для изготовления почвенного настоя стеклянную банку наполнить на 1/4 огородной (садовой) почвенной землей " на 3/4 сырой водой. Навозный настой готовится из конского навоза, выдержанного в сухом прохладном месте (в подвале) в течение 10 дней; около 100 г такого навоза постепенно залить одним литром кипятка при постоянном помешивании. Можно с успехом использовать смешанный настой: 100 г почвенной земли и 50 г навоза на 1 л воды. Приготовленную тем или иным путем питательную среду оставить на несколько дней (7-10) открытой с тем, чтобы в ней развилось возможно больше бактерий.

Заражение среды, простейшими. Несколько банок наполнить водой из разных небольших водоемов - пруд, лужа, придорожная канава - вместе с небольшим количеством ила и водной растительности - свежей и разлагающейся. Для устранения хищных животных (рачков, червей), губящих культуру, воду через несколько дней профильтровать, пользуясь сеткой из мельничного газа (средней плотности) или из капроновой ткани. Эту воду прилить в сосуды с приготовленной питательной средой (по 200-500 см3 в каждый).

Сборная культура простейших ставится не позднее как за месяц до использования ее на занятиях. Время от времени она просматривается, для чего пипеткой берут пробы из разных мест - со дна, ,из толщи воды, с поверхности пленки, с освещенной и затененной сторон; отмечают при этом, в какой банке и в каком месте наблюдается скопление простейших и каких именно.

САРКОДОВЫЕ

Амебы. Амебы встречаются в мелких пресноводных водоемах-прудах, канавах, лужах, болотах, - богатых гниющими растительными остатками

313

преимущественно в придонном слое воды. В теплое время года их можно собрать для занятия непосредственно в природе. Тем или иным путем взмучивают поверхностный слой ила и собирают его вместе с водой в сосуд шт экскурсионное ведерко. В частности, этого можно добиться, опустив в воду аквариумный сосуд или ведерко отверстием книзу; у самого дна водоема сосуд резко наклонить; выходящий воздух поднимет со дна, который вместе с водой наполнит банку. Амеб собирают также, осторожно соскабливая скальпелем поверхностный налет на нижней стороне плавающих листьев волной растительности. Использование материала возможно после того, как принесенная с водоема проба спокойно постоит несколько часов.

В более позднее время года амеб специально культивируют. В простейшем случае ограничиваются тем, что доставляют в лабораторию из подходящих водоемов воду вместе с илом и гниющими остатками; материал используют через 1/2 месяца. Культура становится обильнее, если ее подкормить; для этого доставленную из водоема воду после фильтрования приливают по полстакана в сосуд (банку, простоквашницу), в котором за 3-4 дня до этого нарезанное сено залито водой (слой воды над сеном около 2 см).

Культура амеб, и в частности амебы протеус, развивается еще лучше на специально приготовленной питательной среде, исключающей к тому же присутствие рачков: на рисовом настое, почвенном настое и пр. (см. стр. 313). Лучшие результаты достигаются смесью почвенного настоя и настоя из молодых древесных веток. Одновременно с настоем на огородной почвенной земле (см. стр. 313) готовится настой из молодых лиственных деревьев. Через 7-10 дней слить в один сосуд оба настоя в равных частях. Богатая микрофлора разовьется здесь через 5-7 дней. Питательную среду разлить в несколько небольших кристаллизаторов (чашки Коха) и заразить амебами, выловив их пипеткой из пробы, принесенной с водоема.

В любом случае культура сохраняется жизнеспособной 2-3 месяца, после чего следует произвести пересев в свежую питательную среду.

Перед началом занятия, по крайней мере за четверть часа, животные рассаживаются на предметные стекла. Пробы берутся пипеткой из придонного слоя культуры и с поверхностной пленки. Из сборной культуры быстрее и с большим успехом корненожки вылавливаются следующим путем: на поверхность воды осторожно плашмя накладываются покровные стекла; они удерживаются на пленке поверхностного натяжения и на нижней их стороне собираются саркодовые; через несколько часов или на другой день перед занятием стекла снимают и, не переворачивая, переносят на предметные стекла снабдив их восковыми ножками.

Микропрепараты менее пригодны для проведения занятия и используются при отсутствии живого материала. Для изготовления микропрепаратов амебы фиксируются подогретой перед использованием до 50-60° жидкостью Шаудина. Приготовление фиксатора: 8-9 г кристаллической сулемы нагреть до кипения в 100 см3 дистиллированной воды, охладить в темноте (получится насыщенный раствор), декантировать, смешать с 96-градусным или абсолютным спиртом в отношении 2:1. Покровное стекло с амебами, снятое с поверхностной пленки в аквариуме и снабженное восковыми ножками, наложить на каплю фиксирующей жидкости на предметном стекле. Жидкость фиксирует и одновременно приклеивает амеб к стеклу. Через 3-5 мин амеб подвергают иодированию, т. е. отмыванию иодом фиксатора, содержащего-сулему: покровное стекло снимают и погружают в смесь 1-2 частей йодной тинктуры и 100 частей 70-градусного спирта; сулема и йод образуют легка растворимое в спирте соединение. Смесь сменяют несколько раз до прекращения обесцвечивания (потребное для этого время не превышает 5-10 мин). Амебы остаются при этом приклеенными к стеклу жидкостью Шаудина.

Для лучшего выявления ядра препарат окрасить гематоксилином по Делафильду: промыть его предварительно 70-градусным спиртом, а затем дистиллированной водой и перенести на сутки в водный раствор красителя" (одна часть красителя на 150-200 частей дистиллированной воды). Гематоксилин можно заменить квасцовым кармином. Промыть препарат в воде,

314

провести быстро через спирт возрастающей крепости для обезвоживания, просветлить в ксилоле (гвоздичном масле) и быстро заключить в канадский бальзам.

Арцеллы и диффлюгии. -В культурах амеб всегда встречаются в большем или меньшем количестве и пресноводные раковинные корненожки - арцеллы, диффлюгии и др. Сбор их в природе, культивирование в лаборатории, приготовление питательной среды и рассаживание на предметные стекла осуществляется так же, как указано для амеб. Богатые сборы раковинных корненожек дает выжимка (рукой) мха: выжатый мох прополоскать в отжатой жидкости и снова выжать его. Изготовление тотальных ;микропрепаратов ведется так же, как описано для амеб; микропрепараты раковин готовятся более простым путем,

Изготовление микропрепарата раковин на глицерин-желатине. Раковины корненожек не нуждаются в фиксации, окраске, обезвоживании и просветлении; вместо канадского бальзама можно использовать смесь глицерина-желатины. Приготовление: 7 г кристаллической желатины размочить в течение 2-3 ч в 42 СМ3 дистиллированной воды; добавить 50 г глицерина и 0,5-1 г кристаллической карболовой кислоты; смесь, помешивая, подогреть на водяной бане, профильтровать через стеклянную вату и охладить; смесь затвердевает в прозрачную желеобразную массу.

Покровное стекло, снятое с поверхностной пленки аквариума с приставшими к нему раковинами, перенести на сутки в глицерин. Кусочек приготовленной смеси поместить в центре предметного стекла и слегка подогреть (над пламенем спиртовки, на металлической пластинке, лежащей на электроплитке, или иным путем); смесь разжижается; накрыть ее покровным стеклом с раковинами корненожек и очень осторожно подогревать с тем, чтобы избежать бурных токов смеси, которые могут вынести объект за пределы покровного стекла. Смесь должна заполнить все пространство под покровным стеклом, не выступая за края его.

Раковина фораминифер. Эти корненожки собираются вместе с морским песком. Песок отмучивают для удаления ила; грубые примеси удаляются просеиванием через металлическое решето с ячеями до 2 мм в диаметре. Фиксировать 70-градусным спиртом. Раковинки выбирают препаровальными иглами под лупой. Микропрепараты готовят на канадском бальзаме с проведением из 96-градусного спирта через абсолютный спирт или, при его отсутствии, через карбол-ксилол: одна объемная часть карболовой кислоты и четыре части ксилола.

ЖГУТИКОНОСЦЫ

Свободноживущие зеленоокрашенные жгутиконосцы. Эвглены и другие подобные жгутиконосцы обитают в стоячей загрязненной воде, т. е. богатой органическими веществами - в прудах, болотах и в лужах поблизости от навозных куч, где они иногда появляются в таких огромных количествах, что окрашивают воду в зеленый цвет.

Эвглен нетрудно разводить на искусственно приготовленной питательной среде. Основу ее составляет минеральная смесь Кнопа, Бенеке или Успенского; смесь Кнопа: сернокислого магния MgSCX-0,25 г, азотнокислого кальция Ca(NO3)2-1,0 г, фосфорнокислого калия КН2РО4 - 0,25 г, хлористого калия КС1-0,12 г, следы хлористого железа FCl3, дистиллированная вода - 1 л. К ней через каждые 1-2 дня добавляется несколько капель мясного бульона. Последний готовится кипячением мелко нарезанных кусочков нежирного мяса с последующей фильтрацией через вату так же, как описано для культивирования дафний (см. стр. 325). Длительное культивирование эвглен возможно и на почвенном настое (см. стр. 313) с добавлением или без добавления бульона.

Культуру эвглен, собранных в природе или разведенных в искусственных условиях, можно "обогатить", т. е. сконцентрировать эвглен в небольшом

315

объеме воды. Для этого сосуд, куда переносят воду с находящимися в ней: эвгленами (стаканчик, пробирку, небольшую колбу), закрывают со всех сторон черной бумагой, в которой вырезают небольшое отверстие; сосуд помещают отверстием к источнику света. Вследствие положительного фототаксиса ( т. е. движения к свету) эвглены скапливаются в течение суток в небольшом освещенном пространстве, откуда они вылавливаются пипеткой.

Микропрепараты жгутиконосцев (эвглен). А. Для обнаружения жгута к капле культуры на предметном стекле прибавить каплю 10-процентного раствора красителя - опаловый синий. Тотчас же сделать на том же стекле тонкий мазок: другое (чистое) предметное шлифованное стекло подвести к капле смеси (культуры и красителя) и, удерживая стекло в наклонном положении, передвигать его вдоль первого стекла; смесь распределится на предметном стекле тонким слоем. После подсыхания нанести на мазок каплю канадского бальзама или глицерин-желатины и накрыть покровным стеклом. Бесцветные жгутики видны на голубом фоне красителя. Б. Для обнаружения хроматофоров обесцветить эвглен, продержав их 1-2 дня в темноте;парамил при этом потребляется, а хроматофоры выступают отчетливее. Фиксировать 2-процентным формалином, обезводить глицерином: к капле воды с фиксированными эвгленами добавить каплю глицерина и отсосать ее (осторожно!); поверх положить комочек .смеси глицерин-желатины, подогреть и; накрыть покровным стеклом.

Трипанозома. Ее изучают в капле крови, взятой из хвоста крысы, зараженной трипанозомами. Тонкий мазок такой крови (технику приготовления см. выше) фиксируют 96-градусным спиртом и просушивают. В посуде с притертой пробкой такие препараты можно длительно хранить.

ИНФУЗОРИИ

Культура туфельки хвостатой. Культура ставится за 2-3 недели до использования ее r.a занятии. Для нее готовится питательная среда по любому описанному ниже способу. 1. Сенной настой: мелко нарезанное луговое сено: залить водой (речной, прудовой), которая должна на 1-2 см выступать над сеном. 2. Сенной навар: 15-20 г мелко нарезанного лугового сена залить 1 .к воды, в колбе с ватной пробкой кипятить 15-20 мин, навар охладить и разлить в чашки или простоквашницы, разбавляя остуженной кипяченой водой. 3. Настой на зернах риса и пшеницы. 4. Навозный настой (см. стр. 313). 5. Молочная питательная среда: чистые химические пробирки залить на 3/4 профильтрованной через бумажный фильтр речной или прудовой водой, прибавить в каждую по 2-3 капли снятого молока, заткнуть ватными пробками.

Приготовленную тем или иным путем питательную среду оставить на несколько дней открытой с тем, чтобы в ней развились бактерии, которыми питаются инфузории. Для заражения к ней прибавляют (около стакана) воды, взятой из придонного слоя с некоторым количеством ила из водоема (пруд, озерцо, лужа), богатого гниющими растительными остатками. Массовые скопления туфелек заметны по краям сосуда поблизости от поверхности воды. В пробирки с молочной средой пересаживают пипеткой по 10-12 туфелек и сохраняют месяцами; 1-2 раза в месяц добавляют по капле молока..

Инфузорий для занятия выбирают из мест их скопления. Для получения: большего количества особей в небольшом количестве воды можно их сконцентрировать одним из следующих способов: 1) культуру профильтровать через складчатый бумажный фильтр, ополоснуть и воронку опрокинуть в чашку Петри; 2) перелить часть культуры в длинную трубку (до 1/2 м), вертикально-закрепленную в штативе: в силу отрицательного геотропизма туфельки соберутся в поверхностном слое; 3) центрифугировать культуру в течение 5 мин. и пробу взять со дна центрифужной пробирки.

Изготовление микропрепаратов туфелек. Тотальные микропрепараты готовят простейшим, хотя и не столь надежным, способом из фиксированных" 3-4-процентным формалином туфелек. После фиксации их в небольшой

316

пробирке осторожно отсосать фиксатор пипеткой ("проверить под лупой, чтобы не удалить инфузорий); обезводить глицерином: внести в пробирку немного смеси равных частей глицерина и воды, через несколько часов заменить (контроль под лупой!) эту смесь более концентрированной - две части глицерина и одна часть воды; через несколько часов сменить смесь на чистый глицерин, в котором сохранять материал не менее суток. Несколько инфузорий перенести в каплю разогретой смеси глицерин-желатины. Можно туфелек окрасить квасцовым кармином, который приливается на несколько минут к фиксированным инфузориям, слегка отмытым водой; до обезвоживания краситель отмывается водой.

Способ приготовления квасцового кармина: к 3-5 г калийных или аммиачных квасцов, растворенных в 100 см3 дистиллированной воды, прибавить 2 г мелкоистертого кармина, кипятить в течение часа, охладить и фильтровать; развитие плесени устраняется добавлением 1 см3 формалина.

Лучшие препараты получаются фиксацией туфелек в течение 10-15 мин жидкостью Шаудина (см. стр. 314) непосредственно на предметном стекле, к которому они фиксатором приклеиваются; фиксирующую жидкость отсосать, иодированием (см. стр. 314) удалить остатки сулемы; стекло с инфузориями перенести в квасцовый кармин. Далее можно подготовить объект к консервации в глицерин-желатине описанным способом после промывки водой, либо проведя его через спирт возрастающей крепости и ксилол, нанести на предметное стекло каплю канадского бальзама.

СПОРОВИКИ

Грегарины. Грегарин добывают из кишечника черного таракана, рыжего таракана (прусака), личинки мучного жука (так называемого мучного червя). Грегарины встречаются и у многих других членистоногих, но в период проведения занятия (поздняя осень) трудно добыть их в живом виде (о вылавливании, хранении и разведении тараканов см. стр. 329). Личинок мучного жука (мучных червей) можно добыть в местах длительного хранения муки, Возможно разведение их в лаборатории. В небольшой деревянный ящик с крышкой насыпать слой огрубей, смешанных с мукой, и накрыть ветошью; поверх насыпать второй слой отрубей и муки. Заполнив ящик наполовину, накрыть верхний слой слегка смоченной ветошью. Внести в ящик несколько жуков или их личинок. Перед началом занятий насекомых вскрывают; извлеченные кишечники переносят на предметные стекла в капле физиологического раствора (3/4-процентный раствор поваренной соли) и измельчают их препаровальными иглами под штат.этой лупой. Техника вскрытия таракана описана на стр. 249: для данного занятия извлекают среднюю кишку (между слепыми пальцевидными придатками в переднем конце ее и мальпигиевыми трубочками - в заднем). Не все тараканы заражены грегаринами. У личянки мучного жука отрезают голову и небольшой участок на противоположном конце тела; кишечник извлекается пинцетом.

Грегарины нескольких видов рода Moriocystis паразитируют в семенных пузырях дождевых червей. (О сборе и хранении их см. стр. 324). Переднюю часть тела червя вскрывают (как указано на стр. 237). Кусок семенного пузыря измельчают в часовом стекле в физиологическом растворе; капельку жидкости отсюда переносят на предметное стекло. Микропрепараты грегарип готовят размазыванием подготовленного материала по предметному стеклу (см. стр. 316), фиксацией жидкостью Шаудииа и окраской кармином.

Для ознакомления с кокцидиями служат их ооцисты в кале кролика и микропрепараты из микротомных срезов кишечника кролика. Небольшой кусочек к"ла молодого кролика растирают с каплей воды на предметном стекле. Для концентрации ооцист <в небольшом объеме жидкости собранный кал кролика растирают в насыщенном растворе поваренной соли " переносят в пробирку с таким же раствором. Цисты постепенно всплывают наверх, при помощи проволочной петли (диаметр около 0,5 см) их собирают с

317

поверхностной пленки. Для получения ооцист на разной стадии споруляции кал г ооцистами сохраняют в 2-процентном растворе К2Сr2O7 в продолжении от 1 до 3 суток.

вольвокс

В летнее время вольвоксов собирают водным сачком из мельничного газа. Сохраняют их фиксированными в 4-5-процентном формалине.

Культивирование. Культуру вольвоксов можно получить на почвенном наваре. 3 кг сухой огородной земли кипятить в 2 л воды в эмалированной посуде; отстаивать в течение двух дней, декантировать. После фильтрации жидкость уварить в колбе из стекла "Дружная горка" до объема в 0,5 л и добавить немного хлористого железа FеСl3 (две платиновые петли). Навар сохранять в эрленмейеровской колбе из того же стекла с пробкой из стерильной ваты. При использовании разбавлять в 40 раз дважды дистиллированной водой. В такую жидкость перенести несколько живых вольвоксов, сохранять на подоконнике.

Изготовление микропрепаратов. Простейший способ: к капле воды с отсаженными фиксированными вольвоксами прибавить немного порошка гуммиарабика (на кончике скальпеля), оставить препарат для высыхания (накрыть каким-нибудь колпаком), нанести на образовавшуюся пленку каплю канадского бальзама или глицерин-желатины, накрыть покровным стеклом.

Предпочтительнее готовить микропрепараты на гуммиарабиковой смеси: в каплю такой смеси на предметном стекле пересадить несколько фиксированных в формалине вольвоксов и накрыть покровным стеклом. Не требуется при этом ни обезвоживания, ни просветления объекта. Способ приготовления гуммиарзбиковой смеси: 1 часть сухого гуммиарабика растворить в 10 частях дистиллированной холодной (без подогревания) воды с добавлением 10 частей глицерина; использовать через несколько месяцев после приготовления.

На глицерин-желатине препараты готовят с предварительным обезвоживанием путем проведения через глицерин возрастающей концентрации (см. стр. 317).

КИШЕЧНОПОЛОСТНЫЕ

Пресноводная гидра. Гидра служит почти единственным представителем тила .Кишечнополостные в пресных водах; все разнообразие кишечнополостных приходится на морские формы. Гидры водятся в различных водоемах, стоячих либо со слабым течением. Чаще всего они населяют прибрежные участки, поросшие водяной растительностью. Здесь они обычно сидят, прикрепившись к нижней стороне листьев, плавающих в воде или погруженных в нее; часто их можно найти на листьях и корешках ряски, КУВШИНКИ, на рдестах, а также на обломках веток, камнях и т. п. Несмотря на относительно крупные размеры тела (нередко длина тела достигает сантиметра и более), заметить гидр на извлеченных из воды растениях довольно трудно: при любом сотрясении гидра сжимается в комочек.

Собирают гидр сачком из редкой прочной ткани, облавливая прибрежные участки воды, поросшие водной растительностью. Крупных животных -жуков, клопов, личинок насекомых - удалить К материалу, собранному в экскурсионное ведерко, добавить водных растений и воды. Сбор возможен также путем просмотра на свет веточек водных растений в стакане с чистой водой. Все собранное перенести в одну или несколько больших стеклянных банок (емкостью в 3-4 л) и оставить в спокойном состоянии на свету до следующего дня. На стенках одного из сосудов и на плавающих листьях можно невооруженным глазом заметить вытянувшихся во всю длину гидр. Сбор гидр будет значительно богаче, если предварительно собранный, сачком материал процедить через металлическое решето с ячеями около 3 мм; экскурсионное

318

ведерко следует сильно встряхивать, чтобы гидры отделились от предметов, на которых сидят; содержимое вылить на решето, под которое подставить тазик; крупные животные останутся на решете, а гидры -• в тазике с водой.

Культивирование гидр. Подготовить аквариумы (2-3) для гидр. В сосудах дно покрыть хорошо промытым песком, слоем в несколько сантиметров, добавить немного крупной гальки для прикрепления гидр; заполнить (на 3/4) водой из водоема, где гидры собраны, профильтровав ее через редкий мельничный газ; в аквариуме поместить немного водных растений, закрепив их в песке (роголистник) или оставить свободно плавающими (ряска).

Из собранного материала выловить гидр и перенести их в подготовленные аквариумы; заметив гидру на стенке сосуда, направить на нее свободный конец длиной (30-40 см) пипетки, слегка толкнуть ее и в то же мгновение всосать ее в пипетку. Обеспечить отсаженным в аквариумы гидрам надлежащий уход, т, е содержание в оптимальных условиях и, главное, достаточное (или обильное) питание. Держать аквариумы при комнатной температуре (18-22°С), на свету, избегая прямого действия лучей солнца и резкой смены температуры. Воду менять частями (1/3) не чаще одного раза в месяц. Тщательно устранять всех животных, пожирающих гидр: жуков-плавунцов, в том числе мелких, их личинок, прудовиков, ресничных червей.

Гидры - хищные животные, питаются животной пищей; мелких животных они ловят в воде в живом виде и убивают. Поэтому кормить гидр нужно рачками (дафниями, циклопами, диаптомусами), мелкими олигохетами, личинками комара-звонца (мотылем) и другими мелкими беспозвоночными. В крайнем случае пригодны мелко нарезанные кусочки дождевого червя, которые нужно подносить пинцетом к щупальцам гидры. Остатки пищи и вообще разлагающиеся частички необходимо регулярно удалять со дна аквариума.

В хороших условиях содержания - оптимальная температура, обильное питание - гидры энергично размножаются почкованием. При наличии большого количества гидр в аквариумной банке, их следует расселить в несколько аквариумов, не допуская чрезмерного повышения плотности (т. е. численности на единицу объема воды). Не менее как за неделю до проведения занятия часть гидр отсадить на полное голодание; у них сформируются половые продукты.

Микропрепараты пресноводной гидры. 1. Тотальные микропрепараты. Живая гидра без расчленения фиксируется 3-4-процентным формалином или какой-нибудь жидкостью, содержащей сулему: подогретой жидкостью Шаудина (см. стр. 315), сулемой с уксусной кислотой (100 см3 насыщенного раствора сулемы и 3-5 см? ледяной уксусной кислоты), жидкостью Ценкера (кристаллическая сулема 50 г, двухромовокислый калий К2СrО7 - 25 г, сернокислый натрий Na2SO4-10 г, вода дистиллированная-1000 еж3; перед употреблением добавить ледяную уксусную кислоту из расчета 5 см? на 100 см3 основного раствора), ценкерформолом (тот же основной раствор с добавлением перед употреблением крепкого формалина вместо уксусной кислоты в том же объеме). Длительность фиксации зависит от рода фиксатора: в формалине- неограниченно, в сулеме с уксусной кислотой-от 5 до 30 мин, в жидкости Шаудина - от 5 до 10 мин, в жидкости Ценкера - от 20 до 30 мин. После фиксации требуется длительная (за исключением формалина) промывка водой (сутки), а вслед за тем 70-градусным спиртом; иодировать (см. стр. 314), перенести снова в спирт 70-градусный, 35-градусный и в воду, скрасить квасцовым кармином (см. стр. 317) или борным кармином (см. стр. 320), просветлить кедровым маслом. Заделка в глицерин-желатину.

2. Микротомные срезы - поперечные и продольные. Живых гидр фиксируют одной из смесей, содержащих сулему, тщательно отмывают водой, 70-градусным спиртом, иодируют, окрашивают борным кармином (1 - 3 суток), переносят для дифференцировки окраски в 70-градусный спирт, слабо подкисленный (до 0,5%) соляной кислотой, на срок 1-3 суток, пока краска будет извлекаться; после этого отмывают в 70-градусном спирте и заливают в парафин; срезы делают толщиной 5-7 мк без дополнительной окраски.

319

Приготовление борного кармина: 2-3 г кармина с 4 г буры мелко растирают в ступке, смесь растворяют в 100 см5 воды при нагревании; после охлаждения добавляют 100 ел*3 70-градусного спирта; после хранения в течение нескольких недель краситель фильтруют.

3. Микропрепараты мацерированных тканей гидры. Мацерации - распадения ткани на отдельные клетки - добиваются одним. описанных ниже способов. Живую гидру поместить на 30-40 мин в слабый спирт (30°), пипеткой перенести ее на предметное стекло, накрыть и слегка придавить покровным стеклом. Иной способ: живую гидру поместить на 1 мин в смесь из 9 частей 5-процентного раствора уксусной кислоты и 1 части 2-процентного раствора осмиевой кислоты, перенести в каплю воды на предметном стекле и придавить покровным стеклом. Полученные тем или иным путем изолированные разнообразные клетки окрасить квасцовым или борным кармином; обезводить в глицерине возрастающей концентрации (см. стр. 317) и перенести в консервирующую смесь (глицерин-желатину).

Морские кишечнополостные. Гидроидных (обелия) собирают в мелководном побережье наших морей - Баренцового, Белого, Черного и на Дальнем Востоке. Фиксировать их одной из смесей, содержащей сулему, или в крайнем случае спиртом либо формалином. Микропрепараты-тотальные и микротомные срезы - готовить так же, как описано для пресноводной гидры. Сцифоидных медуз (аурелия) собирают в тех же морях, где и гидроидных; консервировать 2-процентным формалином. Коралловых полипов (актиний) собирают в тех же морях. Фиксировать смесью содержащей сулему с предварительной анестезией, не позволяющей актиниям сжиматься; для этих целей прибегают к хлоралгидрату, хлороформу, слабому спирту, сернокислому магнию.

ПЛОСКИЕ ЧЕРВИ

Турбеллярии. Пресноводные турбеллярии живут в самых различных водоемах, главным образом в прибрежной зоне, поросшей водной растительностью (особенно рогозом, ситником), под камнями, под корой затопленных бревен, под опавшей листвой на дне водоема, в пазухах листьев водных растений, на нижней стороне плавающих листьев и т. п. Более крупные формы хорошо заметны и снимаются при осмотре извлеченных из воды предметов; более мелкие - слабо заметны и требуют иного приема сбора.

Палкой слегка взмутить поверхностный слой ила; той же палкой тщательно сбить с водных растений все, что к ним пристало - детрит, ресничных червей; обработанный таким способом участок водоема многократно облавливать сачком из материала средней густоты (ячеи в 1-3 мм). Содержимое сачка, включая ил, водные растения и растительные остатки, перенести в экскурсионное ведерко.

Разные водоемы одного типа я тем более различные по своим свойствам - проточные, слабопроточные, стоячие и т. п. - населяют виды разных отрядов турбеллярии. Не следует поэтому ограничиться сбором материала в одном водоеме.

Собранный в природе материал перенести в 2-3 (по числу использованных водоемов) стеклянные банки, емкостью в 2-3 л; оставить в спокойном состоянии на сутки или несколько дней. Осадок ила в банке должен быть после этого довольно значительным-2-3 см, а воды на 2/3 объема; ресничные черви выползают на стенки сосуда.

Культивирование молочной планарии. Соорудить специальный аквариум для ресничных червей. В небольшой кристаллизатор па дно уложить немног; ила и небольших камней, добавить растений (немного ряски, элодеи) и воды, принесенной вместе с червями. Выловить оттуда же пипеткой (пинцетом не пользоваться) возможно больше ресничных червей и перенести в приготовленный аквариум. Воду аэрировать частым (ежедневным) продуванием. Не допускать загнивания воды, иначе планарии быстро гибнут. Кормить можно разнообразными мелкими водными животными как в живом виде, так и трупамп.

320

Планарии поедают и водяных осликов (для облегчения поимки их обрезать им ноги); пригодны также сгустки крови.

Тотальные микропрепараты, Червей с наполненным желудком фиксировать помещением в смесь азотной кислоты и формалина: к 91 объемной части зоды добавить 3 объемные части крепкой азотной кислоты и 6 объемных частей крепкого формалина (40%). Расправить тело подведением полоски папиросной бумаги, которой червь вытаскивается из фиксатора, и осторожным поглаживанием мягкой кисточкой. Промыть объект в 96-градусном спирте, обезводить и заделать в глицерин-желатину или канадский бальзам,

Ланцетовидный сосальщик. Паразитирующих >в протоках печени крупного рогатого скота и овец ланцетовидных сосальщиков можно иногда получить на бойне. Вскрыть протоки печени, извлечь червей, промыть их в воде и фиксировать 10-процентным формалином. Сплющить сосальщика между двумя предметными стеклами, скрепить стекла ниткой и перенести в 96-градусный спирт на несколько часов. Сохраняя червей (спирт 80°), можно в таком виде использовать их на занятии.

Для изготовления тотальных микропрепаратов фиксированные экземпляры перенести на 1-2 ч в воду, интенсивно окрасить (перекрасить) квасцовым кармином и дифференцировать окраску в 70-градусном спирте, подкисленном (1%) соляной кислотой. Обезводить глицерином или карбол-ксилолом в зависимости от выбранного консервирующего вещества - канадский бальзам или глицерин-желатина,

Печеночный сосальщик. На бойне или мясокомбинате можно достать печень, зараженную печеночным сосальщиком и поэтому забракованную ветеринарным надзором. Печень промыть в воде, перенести в препаровальную ванночку и осмотреть. Желчные ходы, где имеются сосальщики, несколько вздуты, стенки их под влиянием жизнедеятельности паразита затвердели, утолщены и вследствие обызвествления утратили эластичность; по этим признакам можно найти места расположения паразитов. Разрезать печень по ходу желчных протоков и обнаруженных живых сосальщиков извлечь пинцетом. Сосальщиков отмыть от желчи в проточной воде в сосуде, затянутом марлей (несколько часов), либо частой сменой воды в сосуде.

Тотальные микропрепараты. Вполне удовлетворительные результаты достигаются без всякой окраски. Червей для уплощения сильно сжимают между двумя предметными стеклами, которые скрепляют ниткой. Фиксируют какой-нибудь сулемовой смесью либо спиртом: на 1--2 мин их погружают в кипящую воду, а оттуда->в 96-градусный спирт на 2-3 ч; нитка удаляется и сосальщиков снова погружают в 96-градусный спирт на 5-6 ч. Обезвоживание и просветление - тем или иным путем в зависимости от характера консервирующей жидкости.

Фиксированных червей можно окрасить кармином. Фиксирующую жидкость отмыть в воде, перенести червей на длительный срок (4-5 дней) в квасцовый кармин, столь же длительно окраску дифференцировать спиртом, подкисленным (1%) соляной кислотой; обезвоживание, просветление и консервирующая жидкость -• как обычно.

Окраска кармином: по Блажину, предложенная специально для паразитических плоских червей, исключает необходимость предварительной фиксации. Готовят два раствора: 1) 0,3 г кармина растворяют в 100 см3 30-процентной молочной кислоты; 2) к 100 см3 воды добавляют 3 капли полутора-хлорного железа и 2 капли 1-процентной карболовой кислоты. Сосальщиков в свежем нефиксированном виде мацерируют в сменяемой, воде (3-4 суток); переносят их в краситель (4-6 ч), контролируя под лупой; основательно обмывают водой и переносят в раствор железа (около суток); вторично промывают в воде; обезвоживают, просветляют и, сплющив (выдержать между двумя предметными стеклами), переносят в консервирующую среду.

Мирацидий печеночного сосальщика. Живую фасциолу поместить в небольшое часовое стекло или сферическую кювету с небольшим количеством зоды; иод штативной лупой 10× найти матку, расщепить препаровальными

321

иглами кожно-мускульный мешок или сделать небольшой крестообразный разрез в области расположения матки; легким надавливанием яйпа переместить в воду. То же повторить с несколькими червями. Яйца многократно пипеткой промыть, удаляя при этом обрывки тканей, и перенести в небольшой сосуд (бюкс, пробирку с пробкой), в который налито немного чистой воды (профильтрованной речной* или дехлорированной из водопровода). Сосуды держать в полной темноте (обернуть черной бумагой и поместить в картонную коробку с крышкой). При комнатной температуре эмбриональное развитие длится около месяца, при температуре 28-30°С - около двух недель, после чего личинка (мирацидий) покидает яйцевую оболочку, как только будет выставлена на свет.

Просмотр производить ежедневно, пока не обнаружатся мирацидий: они вылупляются на глазах у наблюдателя под действием солнечного света (либо вообще освещения) через 3-5 мин после извлечения яиц из сосуда. Бюкеы с яйцами хранить после этого в течение месяца, и в любой день можно вызвать вылупление мирацидиев, перенеся их на предметное стекло. Вылупления мирацидиев после их созревания в темноте не происходит, и по истечении некоторого времени (около месяца) они начинают отмирать, не выйдя из яйца. Так как выход из яйца совершается под действием света, необходимо защищать бюксы с яйцами от света каждый раз при взятии пробы; иначе все мирацидий вылупятся и погибнут.

Спороцисты, редии и церкарии сосальщиков. Несколько живых пресноводных брюхоногих моллюсков-'прудовиков Limnaea, катушек Planorbis, живородок Paludina - поместить в стеклянные сосуды с небольшим количеством воды, наблюдать в течение одного дня; появляющиеся мельчайшие белые точки -• это церкарии, вышедшие в воду из моллюсков. У моллюска, оказавшегося зараженным, разбить и удалить раковину, извлечь печень, измельчить ее в капле воды под штативной лупой 10×, подкрасить нейтральным красным в концентрации порядка 0,001%; найти спороцисты и редий.

Изготовление микропрепаратов: фиксатор - жидкость Шаудина, окраска- кармином и консервирующая среда - канадский бальзам или глицерин-желатина точно так, как описано для инфузорий (см. стр. 317).

Лягушачий многоуст. Лягушачий сосальщик во взрослой стадии живет в мочевом пузыре лягушек и жаб и ведет паразитический образ жизни. Ранней весной в период спаривания лягушек, перебирающихся для этого в воду, сосальщики высовываются из мочевого пузыря в клоаку лягушки и откладывают яйца. Эмбриональное развитие, протекающее в воде, завершается в 2- 3-недельный срок.

Личинка обладает ресничками, расположенными на определенных участках тела, свободно плавает. На протяжении 1-2 суток многие из них прикрепляются к жабрам головастиков; прочие гибнут. Прикрепление осуществляется с помощью провизорного органа -личиночных крючков. Провизорные органы фиксации заменяются дефинитивными. В процессе метаморфоза лягушки и атрофирования жабр сосальщик перебирается через пищеварительный тракт в мочевой пузырь хозяина. Половозрелоегн паразит достигает через 3 года.

Бесхвостые амфибии довольно часто заражены своим сосальщиком, почаще в молодом возрасте (первые годы жизни). Для получения материала следует собрать несколько лягушек небольшого размера (относительно молодых), вскрыть и извлечь мочевой пузырь; осмотреть его снаружи: паразиты видны сквозь тонкие стенки мочевого пузыря лягушки. Вскрыть пузырь в небольшой порции физиологического раствора; тонко оттянутой пипеткой собрать паразитов в часовое стекло, сферическую кювету или предметное стекло с углублением.

Приготовление тотального окрашенного микропрепарата лягушачьего сосальщика. Несколько червей поместить в капле воды на предметное стекло; покровное стекло - с пластилиновыми ножками; надавить на стекло, чтобы немного сплющить паразита. Фиксировать в течение часа крепким спиртом под покровным стеклом; с одной стороны стекла каплями добавлять спирта

322

с другой - оттягивать жидкость фильтровальной бумагой. Снять стекло, промыть объект водой. Подкрасить его водным раствором квасцового кармина: краску нанести на объект, оставить на несколько минут я смыть водой. Обезводить объект глицерином и заделать в глицерин-желатину.

Бычий солитер. В лечебных учреждениях можно иногда получить паразита, изгнанного из кишечника больного. Отделить сколекс с шейкой, фиксировать 70-градусным спиртом или 4-процентным формалином, приготовить микропрепарат на глицерин-желатине, окрасив квасцовым кармином или без окраски.

Из отдельных члеников готовят тотальные микропрепараты с окраской кармином по Блажину (см. стр. 321), если паразит не фиксирован. Членики фиксированного паразита вымачивают в воде (несколько часов), т. е. отмывают от фиксатора, переносят в 5-процентный раствор едкого кали на время, пока не сделаются полупрозрачными, либо в смесь равных частей воды и глицерина (3-4 ч); промывают в воде, переносят в 70-градусный спирт, подкисляют 1-процентной"соляной кислотой (2-3 ч), окрасить квасцовым кармином (контроль под лупой); перед погружением в консервирующую среду членик уплощить сжатием между предметными стеклами.

Финны бычьего или свиного солитера. Их находят в мясе, полученном на бойне; выделить их, заставить головку вывернуться наружу: осторожным нажатием на финну пальцами или помещением их в желчь (при 37-39°С в термостате выворачивается через 20-30 мин). Фиксировать 10-процентным формалином или спиртом, препарат без окраски.

КРУГЛЫЕ ЧЕРВИ

Аскарида. Лошадиную аскариду добывают из тонкой кишки лошадей на бойне. Наибольшей зараженностью отличаются молодые животные. Там же можно получить свиную аскариду из кишечника свиней. Если материал удается получить непосредственно перед занятием, вскрыть живых аскарид.

Для фиксации аскарид и последующего длительного хранения пригодны разные смеси: 4-5-процентный формалин; жидкость Барбагалло, предложенная специально для нематод (100 объемных частей физиологического раствора, т. е. 3/4-процентный раствор поваренной соли NaCl, и 3 объемные части продажного, т. е, 40-процентного формалина); спирт, начиная с 5-градусного, в котором черви остаются на протяжении месяца, с постепенным повышением затем крепости его до 50° подливанием время от времени крепкого спирта. Перед вскрытием черви промываются в проточной или часто сменяемо; воде в течение нескольких часов.

Несколько червей (самок и самцов) фиксируют для последующего приготовления микропрепаратов. В этом случае живую аскариду разрезают на части (длиной 2-3 см) и переносят на время до 2 ч в фиксирующую жидкость; в качестве таковой пригодна любая сулемовая смесь, в том числе горячая жидкость Шаудина и Ценкер-формол (см. стр. 319). Перед, приготовлением микропрепаратов тщательно удалить сулему длительным промыванием в воде или иодированием (содержанием в течение нескольких дней в 70-градусном спирте с йодной тинктурой).

Микропрепараты отдельных участков тела. Для ознакомления с некоторыми структурами, не попадающими в поперечные срезы, полезно приготовить тотальные микропрепараты нужных участков тела. Промыванием в воде отмыть кусочки червя от иода и спирта, просветлить в неразведенной молочной кислоте, длительно (несколько суток) держать в глицерине; консервирующая смесь - глицерин-желатина; покровное стекло с восковыми ножками. Готовят препараты: 1) губы аскариды; поперек срезают скальпелем или лезвием бритвы апикальную часть кутикулы; 2) хвостовой конец самки и самца область расположения анального (у самки) и клоакального (у самца) отверстий.

Микролоепараты поперечных срезов окрашивают квасиовым кармином и

323

в качестве консервирующей среды используют канадский бальзам или глицерин-желатину.

Власоглав и острица. Этих паразитов можно получить в лечебном учреждении: власоглава - после изгнания его из кишечника больного, острицу - путем соскабливания с кожи вокруг анального отверстия у ребенка больного энтеробиозом.

Фиксировать жидкостью Барбагалло. Для изготовления тотальных микропрепаратов просветлить в неразведенной молочной кислоте, обезводить и уплотнить длительным содержанием в глицерине, окрасить кармином; консервирующая жидкость - глицерин-желатина.

Трихина. На бойне легче всего получить личинок в трихинозном, т. е. зараженном трихинами, мясе, например свиньи. Их можно использовать непосредственно: мышцы расщипывают препаровальными иглами на отдельные волокна, просветляют в глицерине и рассматривают в капле глицерина.

Половозрелых особей получают экспериментально. Одной-двум белым крысам (или кроликам) скармливают мелко изрезанное трихинозное мясо в смеси с обычным кормом. На 4-5-й день половозрелых трихин можно найти в кишечнике зараженных животных.

Изготовление тотальных микропрепаратов. 1. Препарат личинки. Трихинозное мясо фиксировать 96-градусным спиртом; перевести в 70-градусный: спирт, а затем в воду; обезводить глицерином (возрастающая концентрация!) и заделать в глицерин-желатину либо окрасить борным кармином, дифференцировать подкисленным спиртом, обезводить спиртом, просветлить и заделать в канадский бальзам. 2. Препарат половозрелых червей. Фиксировать жидкостью Барбагалло, просветлить в неразведенной молочной кислоте, окрасить кармином и заделать в одну из консервирующих смесей. Во всех случаях при изготовлении препаратов на каждый этап обработки отводить значительное время (1-2 дня).

КОЛЬЧАТЫЕ ЧЕРВИ

Дождевые черви. Дождевые черви живут в почве, откуда их выкалывают. Можно собирать их и на поверхности почвы: поднимая или переворачивая камни, доски, куски дерева на огороде "ли в саду, после сильного дождя, когда они выползают из своих норок, где условия для дыхания сделались неблагоприятными из-за вытеснения воздуха из почвы дождевой водой; в ночное время, когда они высовываются передним концом тела из норок; химическим способом - поливанием почвы слабым водным раствором (0,15%) марганцевокислого калия (после сбора немедленно обмыть водой).

Длительное содержание. Заготовленных червей держат на протяжении зимы (или до использования лх на занятиях) живыми в деревянном ящике; приблизительные размеры его 30×40 см при глубине 30 см. Дно ящика покрыть -небольшим количеством сена и наполнить огородной (садовой) землей.. Предпочтительнее заполнять ящик хорошо перемешанной компостной смесью: в равных частях просеянная садовая земля и тщательно измельченные растительные остатки - ботва огородных растений, опавшие листья и т. п.; можно добавить немного конского навоза. Червей поместить из расчета 100 шт. на 2-3 ведра земли или смеси. Землю или компост не уплотнять, накрыть мешковиной в несколько слоев для защиты от света и испарения; мешковину увлажнить и поддерживать ее влажной; ящик хранить в темном месте ири температуре 15-20°С. Время от времени содержимое ящика просматривать, удалять плесень, загнивающие пищевые комки и трупы червей. На вскрытие брать наиболее крупных червей; мелких скармливать животным, содержащимся в живом виде (гидры и др.).

На занятии черви используются как в живом виде, так и умерщвленными для вскрытия. Червей убивать за 1-2 ч до начала работы: в парах хлороформа (одна часть хлороформа на 100 частей воды) или в 10-15-градусность спирте; отмыть в воде от слизи и комочков земли.

324

Несколько умерщвленных червей содержать в 30-градусном спирте па протяжении нескольких дней; вследствие мацерации тканей кутикула отслаивается и используется на занятии для изучения под микроскопом ее строения.

Изготовление микропрепаратов поперечных срезов. Очистить кишечник от содержимого (песка, препятствующего резанию на микротоме): червей содержать (1-2 дня) в чашке Петри на влажной фильтровальной бумаги, пересадить в сосуд с картофельной мукой (2--3 дня). Фиксировать червя целиком: в парах хлороформа (10-15 мин), погрузить (1-2 мин) в один из сулемовых фиксаторов, например, Ценкер-формол; извлечь и разрезать поперек на куски длиной в 1 см; выбранные для заливки куски снова погрузить в фиксатор на 3-4 ч. После отмывки и иодирования окрасить борным кармином, дифференцировать подкисленным 90-градусным спиртом, провести через спирт возрастающей крепости, просветлить ксилолом и залить в парафин; далее - резка на микротоме и окраска срезов.

Пиявки. Наиболее удобны для занятия крупные пиявки- медицинская к ложноконская. В зарослях водных растений собирают их водным сачком; в прибрежном мелководье, где они хорошо видны, собирать руками.

Заготовленные с осени пиявки сохраняются живыми длительное 'Время. Содержать их можно в любой стеклянной банке, наполовину наполненной водой, плотно покрытой стеклянной пластинкой (с грузом). Живым кормов служат улитки; можно кормить кусочками дождевых червей или мясом

ЧЛЕНИСТОНОГИЕ

Жаброноги. Пресноводные жаброноги бранхинус, пристицефалус, хиро-цефалус и др. - живут в мелких водоемах, чаще в пересыхающих; в значительных количествах появляются весной и тогда сбор их не представляет труда. Солоноводные рачки - артемия - встречаются в мелководье Черною и Каспийского морей. Они хорошо разводятся в аквариуме с морской водой или в растворе солевой смеси, близкой по составу к морской воде.

Тотальные микропрепараты готовят из рачков, фиксированных 96-градусным спиртом или 4-процентным формалином; окрасить квасцовым или борным кармином; Просветление и уплотнение; консервирующая среда либо глицерин-желатина с обезвоживанием в глицерине, либо канадский бальзам с проведением через спирт и ксилол.

Грудные ножки, ввиду их особого значения для характеристики жаброного в, вычленить препаровальными иглами и без окраски, проведя через глицерин, заделать в глицерин-желатину либо непосредственно в гуммиарабиковую смесь (см. стр. 318).

Дафнии. Дафниями, или водяными блохами, называют ветвистоусых не только из рода Daphnia, но и из других смежных родов - зямоцефалус, скафолеберис, цериодафния и др. Дафнии, как и другие ветвистоусые, распространены в самых различных водоемах - стоячих или с замедленным течением, по преимуществу среди водных растений, входя всюду в состав планктона. В летнее время выловить дафний сачком или планктонной сеткой. Содержимое сачка или сетки сполоснуть в кристаллизатор или другой сосуд с водой из того же водоема. Рачков доставить в лабораторию в живом виде для их разведения. Если "з аквариума, куда помещены дафнии, удалить в сек, кто может им повредить, то дафнии сохранятся продолжительное время; испаряющуюся воду заменять свежей из того же водоема, профильтрованной через густую сетку. В зимнее время доставить в лабораторию кусок льда вместе с вмерзшим илом из прибрежной части водоема, где летом встречались дафнии. Принесенную пробу содержать при комнатной температуре в стеклянной посуде; из зимвих яиц (эфиппиев) вылупятся самки дафний.

Культивирование дафний. При разведении дафний содержат IB стеклянных сосудах средней и большой емкости при комнатной температуре. Пищей дафниям служат простейшие, бактерии, одноклеточные водоросли и детрит,

325

которые время от времени вносятся в культуру с водой из больших аквариумов или небольших луж и прудов; воду предварительно профильтровать через бумажный фильтр. Важным пищевым компонентом служат тщательно высушенные и растертые в тонкий порошок (пудру) водные растения, а также сухие дрожжи, которые предварительно размешивают в небольшом объеме воды (несколько кубических сантиметров). Следует избегать высокой плотности культуры (т. е. не допускать большой численности дафний на единицу объема воды), время от времени отсаживая часть дафний. При пересаживании удобнее дафний выбирать пипеткой из плоской белой (фарфоровой) посуды - тарелки, фотографической кюветы - либо из чашки Петри, помещенной на белую бумагу.

Не следует пренебрегать культурой, из которой исчезли дафнии: они оставили в ней яйца, которые через некоторое время могут начать развиваться.

Культивирование дафний на мясном бульоне. Дафний можно содержать на протяжении всего года, обеспечивая им питание микроорганизмами, развивающимися на -мясном бульоне. Приготовление бульона: 1 кг мясного фарша, очищенного от костей и жира, поместить в эмалированную кастрюлю, прилить 2 л воды, прибавить 0,5 г соли и оставить на сутки; кипятить до получения 1 л бульона, удалить жир с поверхности, разлить в колбы объемом 75-100 см5 и заткнуть ватой. Колбы с бульоном стерилизовать в автоклаве или кастрюле с водой; с того момента, когда бульон в колбах закипит, стерилизацию продолжать еще в течение получаса. В последующие два дня повторить такую же стерилизацию еще 2 раза; горло колбы завязать пергаментной бумагой (против высыхания); бульон пригоден для длительного хранения (годами).

Перед кормлением дафний одну из колб открыть, дать ей постоять двое-трое суток; бульон помутнеет и покроется пленкой. Помутневший бульон перенести дафниям из расчета 1 см3 бульона на 1 л культуры дафний. На следующий день или позднее, когда помутневшая вода в сосуде с дафниями вновь сделается прозрачной, бульон снова вносится в том же объеме; кормление продолжается регулярно на протяжении двух недель, после чего берется новая колба с бульоном.

Устранение загнивания воды. Вода в культуре дафний должна быть всегда чистой; для этого всякие частицы, способные загнивать, необходимо из культуры удалять; в затруднительных случаях следует пересадить дафний в чистую воду.

Микропрепараты. Тотальные микропрепараты готовят из дафний, фиксированных 3--4-процентным формалином или какой-нибудь другой фиксирующей жидкостью; длительно отмывать фиксатор (частой сменой воды); обезвоживание - последовательным помещением в растворы глицерина возрастающей концентрации, каждый раз длительно выдерживая в них рачков. Окраска кармином (3-4 дня), но вполне удовлетворительные препараты получаются и без окраски; дифференцировать окраску несколько дней подкисленным спиртом. Для заделки в консервирующую жидкость можно использовать канадский бальзам (с проведением через ксилол) или смесь глицерина-желатины; покровное стекло снабдить восковыми ножками.

Особенно важны микропрепараты грудных ножек, главным образом третьей пары, которые позволяют ознакомиться с фильтрующим аппаратом ветвистоусых. Эти препараты готовятся без окраски, обезвоживания и просветления; следует под штативной лупой препаровальными иглами извлечь ножка 3-й пары, перенести их на предметное стекло в каплю консервирующей жидкости - гуммиарабиковой смеси (см. стр. 318) или глицерин-желатины.

Циклопы. Циклопы населяют самые различные водоемы - пруды, озера, реки, лужи, а также моря - и входят в состав планктона, чаще - мелководного; некоторые из них живут в придонном слое воды. Эти рачки широко распространены по всему земному шару и в разных водоемах образуют свойственные им комплексы видов. Материал собирается в природе методами сбора планктона и фиксируется 2-3-процентным формалином.

326

Культивирование циклопов. Циклопов нетрудно разводить и на протяжении всего года иметь их в живом виде. Следует при этом иметь в виду и общие указания о культивировании беспозвоночных (см. стр. 312). Выловленных из какого-либо водоема циклопов переносят в сосуд с водой, взятой IB того же водоема и профильтрованной через мельничный газ, иную плотную ткань или бумажный фильтр (для удаления хищников, которые могут уничтожить культуру); пригодна и водопроводная вода, но после дехлорирования ее. Для циклопов, как животных активно плавающих, желательно использовать посуду цилиндрической формы-стаканы или эрленмейровские колбы - с тем, чтобы столбик воды был, по возможности, больше, а поверхность - минимальной. В '100 см? воды можно содержать 10-15 взрослых циклопов. Воду часто меняют чтобы избежать загнивания; в летние месяцы вода сменяется каждый день или через день; в иное время года - реже: до недели. Каждый раз при смене воды циклопы пересаживаются в чистый сосуд. Чем чище вода, тем успешнее выжи ание циклопов; в загрязненной воде, содержащей гниющие остатки пищи, грибковые разрастания, высокую концентрацию органических веществ, развитие циклопов нарушается, гибель их, особенно личинок, возрастает.

Для пересаживания рачков содержимое сосуда выливают частями в большое часовое стекло или в стеклянное блюдце, поставленное вблизи источника света (лампы). Подросшие личинки и взрослые циклопы заметны и вылавливаются пипеткой поодиночке; молодые личинки (науплиусы) собираются у освещенного края в силу свойственного циклопам положительного-фототаксиса. Выборка облегчается, если часовое стекло (блюдце) поместить на черную бумагу: прозрачные рачки при этом более заметны.

Циклопы - животные, хищные; пищей им служат мелкие организмы, прежде всего - простейшие. Профильтрованная вода, используемая для разведения рачков, содержит бактерий, детрит и растворенные органические вещества; если они и пригодны для питания, то пища эта во всяком случае качественно неполноценна. Необходимо дополнительно подкармливать рачков инфузориями (туфельками); которых для этого специально разводить (см. стр. 316 культивирование парамеций). Инфузорий, сконцентрированных в небольшом объеме центрифугированием, фильтрованием или иным способом, переносят пипеткой в культуру циклопов по нескольку капель в каждый стаканчик. В культуре всегда должен быть неиспользованный остаток инфузорий; (проверяется частым просмотром на глаз). Время от времени следует добавлять небольшую дозу высушенных и растертых в тонкий порошок водных растений (см. стр. 326).

Изготовление микропрепаратов. Вся морфология циклопов вполне успешно изучается на микропрепаратах. Тотальные микропрепараты готовят ил рачков, фиксированных формалином. Обезводить их путем последовательного помещения в глицерин возрастающей концентрации и заделать в смесь глицерин-желатины; покровное стекло снабдить восковыми ножками. Полезно-заготовить следующие тотальные препараты: самка спинной стороной кверху - основной препарат; самец в том же положении - для изучения вторичнополовых признаков; самка брюшной стороной кверху или сбоку для констатирования отсутствия конечностей на абдомене.

Микропрепарат грудных ножек циклопа позволит студенту без всякого труда ознакомиться с двуветвистой (расщепленной) ножкой, вполне соответствующей примитивной конечности, исходной для всех членистоногих. Изготовление его несложно. Под штативной лупой с помощью препаровальных игл извлечь из циклопа грудные ноги; перенести их без обезвоживания и; окраски на предметное стекло в каплю консервирующей смеси - гуммиара-биковой (см. стр. 318) или глицерин-желатину.

ВЫСШИЕ РАКИ

Речной рак. Речные раки у нас широко распространены, подводятся лишь в определенных местах, в водоемах с чистой прозрачной водой.

327

Речной рак весьма подвижен. Он плавает, хотя и не длительно пользуясь своими плавательными ножками, как веслами; он ходит по дну водоема опираясь на свои холные ноги. Активен он главным образом в ночное время' выискивая добычу. Пища рака разнообразна: водяные растения мелкие вод-' ные животные (головастики, личинки насекомых, моллюски) и трупы животных. Днем он скрывается под различными предметами - камнями корягами корнями растений - либо в вырытых им самим норках. Заготовляют их заранее, в летнее время. Раков ловят на приманку. Необходимо знать места гае речные раки постоянно водятся; здесь в воде ставится ловушка, или рачевня; это закрытая корзинка из прутьев, с отверстием, сделанным так, что рак свободно проходит внутрь, а выбраться из нее -не может; в ловушку кладется рыба, лягушка или иная наживка. Для занятий в зимнее время речных раков сохраняют, как правило, в фиксированном виде, в 3--4-процентном формалине. Сбор раксв в большом количестве - дело хлопотное; можно приобретать фиксированных раков у торгующих организаций в Москве.

ПАУКООБРАЗНЫЕ

Паук. Пауки, в частности паук-крестовик, широко распространены. Собирают их в августе-сентябре, когда встречается много половозрелых особей. Фиксировать 96-градусным спиртом или 10-процентным формалином. Полезно приготовить микропрепараты: 1) конечности паука: вычленить препаровальными "глами, перенести (без окраски и обезвоживания) в гуммиара-биковую консервирующую смесь; 2) паутинные бородавки: вырезать часть хитинового покрова брюшка вместе с паутинными бородавками, выварить в термостате в едкий щелочи (15-20%), обезводить, провести через ксилол в канадский бальзам или гуммнарабиковую смесь; 3) молодые пауки (тотальные микропрепараты): выварить в едкой щелочи, обезводить спиртом возрастающей крепости, просветлить кедровым маслом и перенести в консервирующую среду (канадский бальзам).

Скорпион. Скорпионы водятся в Закавказье, Средней Азии и некоторых других местах. Фиксировать парами хлороформа и эфира и хранить в сухом виде либо фиксировать спиртом и сохранять в нем же.

Клещи. Мучных клещей выбирают под лупой, фиксируют 10-процентным формалином, в котором и сохраняют.

Водяные клещи обитают в самых различных водоемах от рек и глубоких озер до ключей и временных луж; чаще всего они попадаются в прудах; заросших растительностью. Многие из них хорошо плавают, другие ползают по дну водоема. Для более полного состава клещей собирать разными способами: фильтрацией воды через сачок и планктонную сетку, подобно планктону, извлечением поверхностного слоя ила с помощью скребка, облавливанием мест, поросших растительностью. По большей части клещей нетрудно выбирать из пробы, так как они отличаются яркой и пестрой окраской; выбирать их пипеткой из небольшого сосуда (кристаллизатора), куда по частям переносить извлеченную из водоема пробу. Добывать водяных клещей можно в -любое время года.

При длительном содержании водяных клещей живыми руководствуются указаниями о культивировании других водных беспозвоночных - планарий, рачков и др. Большинство водяных клещей - хищники. Кормить их мелкими водными животными - инфузориями, коловратками, рачками, личинками поденок и комаров и др.В аквариуме клещи подолгу выживают.

Паразитических клещей, например иксодовых, можно собрать с различных домашних животных, пробывших некоторое время в лесу, на которых они садятся для кровососания. Фиксировать их 70-градусным спиртом, в котором и хранить Тотальные микронрепараты различных клещей и микропрепараты отдельных частей тела (хоботок, брюшная сторона тела) готовить из фиксированного материала: отмыть фиксатор в воде, выварить клещей в слабом растворе едкой щелочи (без нагревания, около суток), обезводить спиртом

328

возрастающей крепости, окрасить пикриновой кислотой, растворенной в ксилоле.

МНОГОНОЖКИ

Костянка и кивсяк. Обе формы широко распространены у нас и без труда; обнаруживаются в укромных местах (в лесу, огороде, в саду) - под стволами лежащих на земле деревьев, под корой старых пней и стволов, под камнями и опавшей листвой, в кучах неубранных остатков лесоразработки, под. Комьями земли и т. п. Здесь костянка днем скрывается, выходя в ночное время на охоту за добычей (насекомые и их личинки, пауки и мелкие черви) кивсяк питается здесь же гниющими растительными остатками. Многоножки, фиксируются 70-градусным спиртом и хранятся в нем же.

Изготовление микропрепаратов: 1) отделить заднюю часть тела костянки, выварить при нагревании в едком кали (15-20%), промыть водой, перенести, в гуммиарабиковую смесь; 2) отделить голову с ногочелюстями и приготовить такой же микропрепарат на гуммиарабжовой смеси; 3) вычленить ротовые: придатки - верхнюю губу и гипофаринге, а также конечности, включая многочелюсти, разложить на одном-двух предметных стеклах, нанести капля по капле из пипетки жидкость Карнуа (1-5 мин), жидкость заменить 95-градусным спиртом, слить спирт и нанести несколько капель 0,25-0,5-процентного раствора целлоидина или коллодия в смеси равных частей абсолютного спирта и серного эфира (1/4-1/2 мин) до образования загустевшей пленки. Жидкость Карнуа: 60 частей абсолютного спирта, 30 частей хлороформа, 10 частей ледяной уксусной кислоты. Заделать в глицерин-желатину; 4) туловищную ногу вычленить и перенести в гуммиарабиковую смесь; 5) голову кивсяка выварить в едком кали и заделать в гуммиарабиковую смесь (см. выше препарат из.головы костянки); 6) то же несколько (5-6) передних сегментов туловища кивсяка.

НАСЕКОМЫЕ

Черный таракан. Тараканов заготовляют заранее, вылавливая их в жилых помещениях, где они водятся, умерщвляют парами эфира или хлороформа; сохраняют в 70-градусном спирте либо умерщвляют перед началом занятий. Желательно до начала занятия по внешней морфологии насекомых выварить фиксированных тараканов в 20-процентном едком кали в течение-20 минут; мягкие части (мускулатура) при этом растворяются и вычленение нужных элементов идет более успешно.

Для вскрытия нужны свежефиксированные экземпляры. При хранении живыми и при разведении тараканов содержат в деревянных ящиках без щелей, закрытых со всех сторон; одна стенка ящика заменяется частой проволочной сеткой. Дно устилают опилками и скомканными клочками бумаги. Кормом служит слегка смоченный водой хлеб, который часто сменяют, а также сырые овощи, необходима и вода в плоском сосуде (чашки Петри). Тараканов содержат в теплом затененном месте, учитывая отрицательный фототаксис у них, как насекомых с ночным образом жизни.

Перед началом занятия тараканов фиксируют или анестезируют парами хлороформа или эфира в плотно закрывающемся стеклянном сосуде, а затем, вываривают в 20-процентном едком кали (5-10 мин) для. большей отчетливости сегментации тела. Длительное хранение фиксированных тараканов возможно в 70-градусном спирте.

Изготовление микропрепаратов. Антенны, околоротовые органы (включая верхнюю губу), головную капсулу и ноги, после отчленения их (см, стр. 224) у свежефикскрованного или заспиртованного таракана, вываривают в .20-процентном едком кали (20 мин), отмывают едкую щелочь в воде с добавлением уксусной кислоты ", в зависимости от избранной консервирующей смеси, подготавливают к заделке: 1) канадский бальзам: обезвоживание в. абсолютном

329

спирте (10-40 мин), просветление в гвоздичном масле или ксилоле (5- 15 мин); 2) глицерин-желатина: обезвоживание и просветление в неразведенном глицерине; 3) гуммиарабиковая смесь: без обработки. В большинстве случаев требуется снабдить покровное стекло восковыми ножками.

Перед заделкой в один препарат нескольких мелких частей (ротовые органы!), чтобы сохранить желательное расположение, следует приклеить их к предметному стеклу раствором коллодия или целлоидина; пригоден и яичный; белок. Последний готовят заранее для длительного хранения: взбить белок в пену, после опадения ее смешать с равным объемом глицерина, фильтровать через складчатый фильтр, прибавить несколько кристалликов тимола или немного салицилового натра или камфары.

Жуки. Наиболее крупные формы встречаются среди водных жуков: плавунец окаймленный, плавунец широкий, водолюб. В прудах и более мелких водоемах они встречаются с весны до глубокой осени. Собирают их водным сачком или скребком.

Водных жуков можно длительно сохранять живыми в больших аквариумных банках. Плавунцов кормят мясом и рыбой; водолюбов - листьями: Салата и капусты. Банки тщательно закрывать: жуки выбираются из аквариумов, а в природе совершают ночью перелеты из одного; водоема в другой.

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ОЗНАКОМЛЕНИЯ С ПОСТЭМБРИОНАЛЬНЫМ РАЗВИТИЕМ НАСЕКОМЫХ

Серия личинок при неполном метаморфозе. Такая серия одного насекомого для иллюстрации развития с неполным метаморфозом готовится в микропрепаратах. Наиболее удобным материалом служат черный таракан или какой-нибудь водный клоп, например гладыш. Личинок таракана выращивают (так же, как и взрослых, см. выше); личинок гладыша вылавливают из водоема в разное время летнего периода.

Фиксировать можно 2-3-процентным формалином, обезводить путем помещения в глицерин возрастающей крепости и заделать в смесь глицерин-желатины. При фиксировании 70-градусным спиртом обезводить спиртом возрастающей крепости, просветлить ксилолом и заделать в канадский бальзам. Личинок на более молодых стадиях можно включить по нескольку особей в один препарат.

Стрекозы. Стрекозы составляют группу типичных полуводных, амфибийных насекомых; личиночная стадия их развития и весь цикл метаморфоза протекает в воде, в стадии имаго это типичные обитатели воздушной среды. Личинки стрекоз живут в пресноводных водоемах разнообразного типа - реки, озера, пруды, болота и т. п. Некоторые из них входят в состав бентоса, проводя жизнь в придонном слое воды и в иле; их собирают скребком. Большинство видов населяет участки водоема, поросшие водной растительностью; этих личинок собирают водным сачком. Хотя собирать тех и других можно в любое время года, но более успешен сбор в летнее время.

Фиксировать 3-4-процентным формалином и сохранять в формалине. •Часть личинок высушить и сохранять в сухом виде - коромысло, обыкновенная стрекоза.

Часть материала использовать для изготовления микропрепаратов без обезвоживания и окраски. 1. Микропрепараты маски: отделить маску, от головы, выварить ее в едкой щелочи без подогревания, просветлить в глицерине (сутки), заделать в раскрытом виде в консервирующую смесь- гуммиарабиковую (см. стр. 318) или глицерин-желатины (см. стр. 315). 2. Микропрепараты хвостовых листовидных придатков: отделить от абдомена, просветлить в глицерине (сутки), перенести в консервирующую смесь.

Поденки. Личинок поденок собирают планктонной сеточкой там же, где и личинок стрекоз. Фиксировать их 3-4-процентным формалином. Для изготовления микропрепаратов (изучение трахейных жабр и хвостовых придатков) обезводить, выдержав их некоторое время в глицерине возрастающей

330

концентрации; в неразведенном глицерине-сутки. Заделать в глицерин-желатину.

Личинки разные. Личинки майского жука собираются в лесу летом на небольших полянах или на опушке путем обследования участка почвы на глубине до 30 см. Личинки разного возраста (разных генераций) часто обитают совместно. Обварить кипятком и фиксировать 2-3-процентным формалином или 70-градусным спиртом и в той же жидкости длительно сохранять.

Из мелких личинок мучного жука (о разведении их см. стр. 317) или какого-нибудь листоеда приготовить микропрепараты; фиксация, обезвоживание и консервирующая смесь описаны на стр. 317.

Прочих личинок и куколок различных насекомых собирают летом. Гусениц освобождают (выжимают) от внутренностей, шкурка подсушивается и одновременно надувается до нормальной формы и величины.

РАЗНООБРАЗНЫЕ НАСЕКОМЫЕ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ВНЕШНЕЙ МОРФОЛОГИИ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОТРЯДОВ

Материал собирают летом. После фиксации в морилке насекомых хранят сухими или в 75-80-градусном спирте. Из ротовых частей, ног, крыльев готовят микропрепараты, как указано для таракана (см. стр. 329). Голову комара или клопа помещают в консервирующую смесь без расчленения и препаровальными иглами ротовые органы раздвигают в стороны.

Сухой материал перед занятием размачивается. Для этих целей используется водяная баня. В стеклянный сосуд насыпать слой тщательно промытого и прокаленного речного песка, толщина слоя 1-2 см. Песок обильно-смочить, но не допускать скопления воды на дне сосуда. Песок покрыть слоем фильтровальной бумаги, на которую раскладываются насекомые, отобранные для занятия. Образование плесени устраняется добавлением немного тимола или формалина. Сосуд плотно закрыть. Размачивание длится от одного-до нескольких дней.

Для занятия по расчленению ротового аппарата головы отобранных насекомых перед занятием отделяют и вываривают (содержат) в 20-процентном едком кали в течение 5-20 минут; мягкие части (мускулатура и пр.) растворяются и этим облегчается вычленение органов ротового аппарата; голову комара не вываривают. Вываренные головы промывают водой или спиртом и протыкают энтомологической булавкой, которую на занятии используют как держалку.

МОЛЛЮСКИ

Беззубка (перловица). Крупных ракушек (двустворчатых моллюсков) вылавливают со дна реки или озера сачком или скребком; в мелководье - просто руками. В аквариуме они выживают в течение нескольких месяцев. Воду, время от времени частично сменяют. На дно аквариума кладут толстый слой песка (толщиной 8-10 см). В качестве фильтраторов беззубки довольствуются микроорганизмами, развивающимися в аквариуме, и в дополнительном корме не нуждаются.

Перед занятием беззубок фиксируют 1-процентным раствором хлоралгидрата (действие в течение суток), либо помещением на полчаса до вскрытия в воду, подогретую до 40-50°.

Виноградная улитка. Моллюски этого вида распространены на юге и юго-западе СССР в виноградниках, садах и других местах. Фиксируя виноградную улитку, нужно воспрепятствовать сокращению ее тела. Для этого улиток содержат двое суток в закрытом сосуде, доверху наполненном водой, у убитых таким образом улиток разбивают и удаляют раковину, а самих улиток перекладывают на 1-2 дня в 50-градусный спирт или на 12 ч в I-процентный раствор формалина. Длительно хранить виноградных улиток бел раковины в 50-градусном спирте, время от времени сменяя его.

Роговую челюсть и радулу извлечь из глотки, выварить в едкой щелочи

331

(без подогревания) и приготовить микропрепарат на гуммиарабиковой смесн или на глицерин-желатине.

ИГЛОКОЖИЕ

Морских звезд, морских ежей и других иглокожих собирают в наших северных морях. При фиксировании выпустить полостную жидкость, для чего надрезать кожный покров. Через тот же надрез вспрыснуть внутрь 70-градусный спирт и погрузить целиком в спирт той же крепости,

Микропрепараты поперечных срезов через луч звезды готовят из мелких экземпляров; предварительно их декальцинируют, заключать в канадский бальзам.

332


На главную
Комментарии
Войти
Регистрация
Status: 408 Request Timeout